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小鼠基因編輯

簡要描述:小鼠基因編輯是利用分子生物學(xué)技術(shù)對小鼠基因組進(jìn)行定向修飾,廣泛應(yīng)用于疾病模型構(gòu)建、基因功能研究和藥物開發(fā)等領(lǐng)域

  • 更新時間:2025-06-26 08:48:20
  • 訪  問  量:2

詳細(xì)介紹

一、小鼠基因編輯技術(shù)服務(wù)常用基因編輯技術(shù)

  1. CRISPR-Cas9

    • 原理:通過向?qū)NA(gRNA)引導(dǎo)Cas9核酸酶靶向切割特定DNA序列,利用細(xì)胞修復(fù)機(jī)制(NHEJ或HDR)引入突變。

    • 優(yōu)勢:高效、成本低、設(shè)計靈活,可同時編輯多個基因。

    • 應(yīng)用:敲除(KO)、敲入(KI)、點(diǎn)突變等。

  2. 傳統(tǒng)方法(ES細(xì)胞打靶)

    • 原理:通過同源重組在胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)中修飾目標(biāo)基因,再通過顯微注射獲得嵌合體小鼠。

    • 優(yōu)勢:精準(zhǔn)度高,適合復(fù)雜修飾(如條件性敲除)。

    • 缺點(diǎn):周期長(6-12個月)、成本高。

  3. 其他技術(shù)

    • 堿基編輯(Base Editing):無需DNA雙鏈斷裂,直接轉(zhuǎn)換單個堿基(如C→T或A→G)。

    • Prime Editing:更精準(zhǔn)的編輯,可實(shí)現(xiàn)小片段插入/缺失或點(diǎn)突變。


二、小鼠基因編輯技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)流程(以CRISPR為例)

  1. 設(shè)計gRNA和Cas9

    • 選擇靶序列(避免脫靶效應(yīng)),合成gRNA和Cas9 mRNA/protein。

  2. 遞送系統(tǒng)

    • 受精卵注射:將CRISPR組件直接注射到小鼠受精卵中(原核期)。

    • 體外電轉(zhuǎn):對ES細(xì)胞或囊胚進(jìn)行編輯后移植。

  3. 胚胎移植

    • 將編輯后的胚胎移植到假孕母鼠子宮內(nèi),獲得F0代小鼠。

  4. 基因型鑒定

    • PCR、測序或Southern blot驗(yàn)證編輯效果。

  5. 表型分析

    • 根據(jù)研究目的分析生理、行為或分子水平的變化。


三、應(yīng)用場景

  1. 疾病模型

    • 模擬人類遺傳?。ㄈ绨┌Y、阿爾茨海默?。?/p>

  2. 基因功能研究

    • 通過敲除/過表達(dá)探索基因作用機(jī)制。

  3. 藥物測試

    • 評估藥物在特定基因背景下的療效和毒性。


四、注意事項

  1. 脫靶效應(yīng)

    • 使用預(yù)測軟件(如CRISPR Design)優(yōu)化gRNA設(shè)計,并通過全基因組測序驗(yàn)證。

  2. 嵌合體問題

    • F0代小鼠可能為嵌合體,需通過繁育獲得穩(wěn)定遺傳的品系。

  3. 倫理審批

    • 實(shí)驗(yàn)需符合動物倫理規(guī)范(如IACUC審核)。


五、資源與工具

  • 數(shù)據(jù)庫

    • ENSEMBL(小鼠基因信息)、CRISPR Design工具(如Benchling)。

  • 商業(yè)服務(wù)

    • 多家公司提供定制化基因編輯小鼠(如Cyagen、Jackson Laboratory)。


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